FlowCAM 8100 측정시의 수동피펫팅과 ALH 자동샘플링 측정 정확도 비교

FlowCAM은 유체 중의 미세입자를 형상분석하고 개수를 측정할 수 있는 이미지 입자 분석장비입니다. FlowCAM Automated LIquid Handling(ALH) 시스템은 FlowCAM 8000시리즈에 장착하여 최대 96개 샘플까지 연속적으로 처리 가능합니다. Thermo Fisher사의 10um, 20um COUNT-CALTM 표준입자를 사용하여 두 가지 샘플링 방법(수동 피펫팅, ALH에 의한 자동 분배)을 이용하여 공급된 샘플을 FlowCAM 8100으로 입자크기와 개수를 측정하여 비교하는 연구를 하였습니다.
본 연구의 목적은 수동샘플링과 ALH샘플링 방법으로 FlowCAM 8100에 샘플을 주입하여 측정하였을 때 %Recovery와 사이즈 정확도 비교입니다.

<재료 및 시험방법>
입자수 측정을 위해 10μm & 20μm COUNT-CAL 표준샘플 사용(ThermoFisherScientific)하였고, 입자크기 정확도 측정을 위해 20 μm COUNT-CAL 사용하였다.
• 수동 샘플링 : 50 μL, 100 μL, 150 μL, 200 μL 분량의 COUNT-CAL 샘플을 수동으로 피펫팅하여 FlowCAM에 주입.

    각 부피별 4번씩 측정.
• ALH 샘플링 : 50 μL, 100 μL, 150 μL, 200 μL 분량을 COUNT-CAL 샘플을 96개의 Well Plate에 피펫팅하여 FlowCAM에 자동 주입
• 측정 농도(평균 입자수)는 VisualSpreadsheet 장비 프로그램에서 계산됨.
• % Recovery : 다음 식을 이용하여 계산함 :  % Recovery =[(concentration 개/mL)/(3000개/mL)] *100
• 3000개/ml = NIST traceable 샘플 농도
• ThermoFisher Count-Cal Lot# 44663 NIST Traceable Size(um)=20.06 +/-0.12 um

<결과>

<결론>
•수동으로 샘플링한 샘플의 평균 입자수는 3049개/mL인데 이것은 예상 입자수 3000개/mL의 99.5%에 해당하며, 표준편차 99.5, 평균 CV가 6.2%이다.
•ALH로 샘플링한 샘플의 평균 입자수는 3079개/mL인데 이것은 예상 입자수 3000개/mL의 102%에 해당하며, 표준편차 106.3, 평균 CV가 6.0%이다.
•두 가지 샘플링 방법에 의한 입자수 측정 결과는 유사한 성능을 보이며, %CV가 작다.
•두 가지 샘플링 방법에 의한 입자크기 결과는 유사한 성능을 보이며, %CV와 표준편차가 작다.
•ALH 자동샘플링시스템을 사용함으로써 무인으로 분석작업이 가능하므로 수작업 시간을 절감할 수 있다.

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